高效液相色谱法测定复方麻仁丸中大黄素的含量

  复方麻仁丸由火麻仁、大黄、芦荟、白芍、枳实等七味中药制成，具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经之功效，我院临床应用多年，治疗大便秘结、习惯性便秘等颇有疗效。本文运用高效液相色谱法对其大黄中的大黄素进行了含量测定，为该制剂的质量控制提供快速准确的测定方法。
1 仪器与试药 
   P230高效液相色谱仪，UV230紫外检测器，EC2000色谱工作站，Sartorius BP211D型电子分析天平(德国赛多利斯公司)；KQ100DB超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂)；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所)；复方麻仁丸(30g/瓶)及阴性样品(本院中药制剂室，样品批号：020822，021128，030410)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 
   色谱柱：Techsphese ODS-C18(4.6mm×250mm，5um)；流动相：甲醇-水-冰醋酸(80：20：1)；检测波长：254nm；流速：1ml/min；灵敏度：0.02AUFS；柱温：25℃；进样量：20u1；保留时间：13．5分钟；理论塔板数：以大黄素峰计算应不低于3500。
2．2 供试品溶液制备 
   取复方麻仁丸20粒充分研细，精密称取细粉5g，置具塞锥瓶中，加稀盐酸3ml湿润，精密加入甲醇20ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，超声处理30min，放冷。再精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取续滤液5ml置lOml量瓶中，加甲醇至刻度，制成供试品溶液；另取缺大黄的阴性样品同法制得阴性对照液；精密称取经五氧化二磷干燥24h的大黄素对照品12.5mg置5Oml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每ml含大黄素250ug的对照品溶液。
2．3 线性关系考察 
   精密吸取大黄素对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.Om1分别置lOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取以上各浓度溶液及对照品溶液各20u1，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以大黄素峰面积对其浓度进行线性回归，得回归方程A=5.9754×lO000C一8.1135XlO000．R=0.9999(n=6)。结果表明，大黄素进样量在0.5～5.0ug范围内与吸收峰面积值呈良好的线性关系。
2．4 精密度试验 
   精密吸取大黄素对照品溶液(80ug/ml)20ul，分别按上述色谱条件连续重复进样5次，测得大黄素峰面积RSD值为0.99％。
2．5 稳定性试验 
   精密吸取新鲜配制的样品溶液，每隔2h进样20ul，测得峰面积并计算，结果大黄素的日内RSD为1.5％(n=12)，表明样品溶液在24h内测定结果稳定。
2．6 重复性试验
   平行称取同一批号(030410)样品6份，按“2．2”供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件进样20ul，测定并计算含量，结果大黄素平均含量为40.50mg/100g，RSD为0.57％。
2．7 干扰试验 
   取阴性样品对照液，按上述色谱条件测定，结果可见，样品色谱中与对照品溶液在相同的保留时间(tR=13.5min)有相似的色谱峰，而阴性样品无此峰，说明复方麻仁丸的其它成分对大黄素的测定无干扰，且样品中大黄素与其它成分峰可达到基线分离，分离度大于1.5。
2．8 加样回收率试验
   精密称取已知大黄素含量的复方麻仁丸(批号030410)细粉约2.5g，共6份，2份为一组，每一组分别加入大黄素对照品溶液(72.6ug/ml、96.8ug/ml、121.0ug/ml)各10ml，按“2．2”供试品溶液项下制备，依上述色谱条件测定大黄素含量并计算回收率。
2．9 样品测定 
   取三个批号的样品，分别按“2．2”项下方法制得供试品溶液，依上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，外标峰面积法计算样品中大黄素的含量。
3 讨论 
3．1 色谱条件选择 
   参考有关文献，对大黄素对照品溶液在200～400nm波长范围内扫描，结果在254nm波长处有最大吸收且灵敏度最高，故选择254nm为检测波长；经多种比例流动相选择，认为甲醇-水-冰醋酸(80：20：1)最佳，此条件下可免除干扰，使样品中的大黄素分离度好，峰形尖锐。
3．2 提取方法研究
   样品提取先后采用了加热回流提取、甲醇24h冷浸、盐酸-甲醇(3：20)超声处理等方法，结果发现盐酸-甲醇(3：20)超声处理30min测得的大黄素含量较高，且操作简便。